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  • ROS/Src /JNK 信号通路在香烟诱导气道上皮细胞黏液高分泌中的作用

    目的 探讨在香烟诱导气道上皮细胞黏蛋白MUC5AC 表达过程中Src / JNK 信号通路的作用。方法 香烟抽提物预处理的人气道上皮A549 细胞, 分别以活性氧( ROS) 清除剂DMTU、JNK 特异性抑制剂SP600125 及Src 激酶抑制剂PP2 干预。测定各组细胞中ROS 的含量, 采用RT-PCR、ELISA 法观察细胞黏蛋白( MUC) 5AC转录水平及培养上清液中MUC5AC 蛋白水平的改变,以Western blot 法检测细胞表皮生长因子受体( EGFR) 的蛋白表达。结果 细胞暴露于不同浓度的香烟抽提物中, ROS的量呈浓度递增; ROS清除剂DMTU 显著降低香烟所致的Src 磷酸化; Src 特异性抑制剂PP2 处理组中的JNK 磷酸化水平与对照组比较有明显下降, MUC5AC 的表达水平也明显降低; JNK特异性抑制剂SP600125 组中MUC5AC 的蛋白表达和基因转录水平较对照组均明显降低。结论 ROS-Src-JNK信号通路可能参与A549 上皮细胞中MUC5AC 的表达调控。

    发表时间:2016-09-14 11:23 导出 下载 收藏 扫码
  • 磷酸化细胞外信号调节激酶1/2定位于成骨细胞的局部黏附时需要Src活性

    目的 探讨血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor, PDGF)刺激成骨细胞,对磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(phosphorylation extracellular signalregulated kinase1/2, pERK1/2)位置的影响。方法出生3 d清洁级健康小鼠10只,雌雄不拘,体重6~9 g。取小鼠颅骨,分离培养原代成骨细胞。取第6代成骨细胞,1%血清培养液培养12 h后, 随机分成经10 μmol/L PP2处理30 min组(实验组)和未处理组(对照组),每组再随机分成2个亚组: 其中一组用PDGF (20 ng/ml)刺激10 min,另一组不用PDGF刺激,采用免疫组织化学染色检测pERK1/2分布。另取第6代成骨细胞,当细胞生长至80%融合时,用细胞刮随机分成2组,一组用10 μmol/L PP2预处理30min(实验组),另一组不用PP2作用(对照组),再用20 ng/ml PDGF培养12 h,采用划痕愈合法检测PP2对成骨细胞在PDGF刺激下迁移能力的影响。另取第6代成骨细胞,调整细胞浓度1×106/ml,随机分成2组,分别经DMSO(对照组)和10 μmol/LPP2(实验组)预处理30min,每组再随机分成2个亚组: 其中一组用PDGF(20 ng/ml)刺激10 min,另一组不用PDGF剌激,采用Western blot检测细胞骨架蛋白内pERK1/2活性。结果 免疫荧光染色结果显示,PDGF促进pERK1/2定位于成骨细胞的局部黏附和细胞核内; 而PP2显著抑制了由PDGF刺激引起的pERK1/2定位于成骨细胞的局部黏附, 但并不影响pERK1/2定位于细胞核内。细胞划痕愈合实验显示,PP2明显抑制了由PDGF所诱导的成骨细胞迁移。Western blot检测结果显示,PP2明显抑制了由PDGF所诱导的成骨细胞局部黏附内ERK1/2的磷酸化。结论 PDGF通过激活Src活性,促进pERK1/2定位于成骨细胞的局部黏附内;PP2通过抑制pERK1/2定位于成骨细胞的局部黏附,从而抑制由PDGF所诱导的成骨细胞迁移。 

    发表时间:2016-09-01 09:20 导出 下载 收藏 扫码
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