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找到 关键词 包含"香烟" 5条结果
  • ROS/Src /JNK 信号通路在香烟诱导气道上皮细胞黏液高分泌中的作用

    目的 探讨在香烟诱导气道上皮细胞黏蛋白MUC5AC 表达过程中Src / JNK 信号通路的作用。方法 香烟抽提物预处理的人气道上皮A549 细胞, 分别以活性氧( ROS) 清除剂DMTU、JNK 特异性抑制剂SP600125 及Src 激酶抑制剂PP2 干预。测定各组细胞中ROS 的含量, 采用RT-PCR、ELISA 法观察细胞黏蛋白( MUC) 5AC转录水平及培养上清液中MUC5AC 蛋白水平的改变,以Western blot 法检测细胞表皮生长因子受体( EGFR) 的蛋白表达。结果 细胞暴露于不同浓度的香烟抽提物中, ROS的量呈浓度递增; ROS清除剂DMTU 显著降低香烟所致的Src 磷酸化; Src 特异性抑制剂PP2 处理组中的JNK 磷酸化水平与对照组比较有明显下降, MUC5AC 的表达水平也明显降低; JNK特异性抑制剂SP600125 组中MUC5AC 的蛋白表达和基因转录水平较对照组均明显降低。结论 ROS-Src-JNK信号通路可能参与A549 上皮细胞中MUC5AC 的表达调控。

    发表时间:2016-09-14 11:23 导出 下载 收藏 扫码
  • 香烟烟雾提取物对转化生长因子β1 刺激的人肺成纤维细胞增殖及分泌过氧化氢的影响

    目的 观察香烟烟雾提取物( CSE) 对转化生长因子β1 ( TGF-β1 ) 刺激的人肺成纤维细胞( HLF) 增殖及分泌过氧化氢( H2O2 ) 的影响, 探讨CSE 可能参与肺纤维化发病的机制。方法 将体外分离培养的HLF 细胞分为对照组和TGF-β1 ( 5 ng/mL) 刺激组, 用不同浓度的CSE( 0% 、2. 5% 、5% 、10% ) 进行干预。应用Brdu ELISA 法检测细胞增殖; 荧光分光光度法测定细胞分泌的H2O2 ; 免疫荧光标记分泌的H2O2 和细胞α-平滑肌肌动蛋白( α-SMA) 表达。结果 TGF-β1 刺激组细胞经免疫荧光标记显示α-SMA 阳性表达, 说明HLF 在TGF-β1 刺激下转化为肌成纤维细胞( MF) 。TGF-β1刺激组中, 与0% 浓度CSE 比较, 2. 5%、5% 浓度的CSE 干预可以显著促进细胞增殖( P lt; 0. 01 或0. 05) , 10% 浓度的CSE 干预抑制细胞增殖( P lt;0. 01) 。对照组中, 与0% 浓度CSE 比较, 2. 5%、5% 、10% 浓度的CSE 均使细胞增殖显著减弱( P lt;0. 01 或P lt;0. 05) , 并呈剂量依赖性。TGF-β1 刺激HLF细胞能产生一定量的H2O2, CSE 干预后分泌产生的H2O2 明显增加( P lt; 0. 01) , 经NADPH 氧化酶抑制剂二苯基碘( DPI) 预处理后检测不到H2O2。免疫荧光标记显示分泌的H2O2 来源于α-SMA 阳性表达的MF 细胞。结论 低浓度的CSE 能够促进TGF-β1 刺激HLF 细胞转化的MF细胞增殖, 并显著增加MF 细胞向细胞外分泌H2O2 , 提示CSE 可能通过氧化应激参与肺纤维化的发生、发展。

    发表时间:2016-09-14 11:23 导出 下载 收藏 扫码
  • 转录因子Klf2 和Nrf2 /Bach1 调控γ-谷氨酰半胱氨酸合酶在气道上皮细胞中的作用

    目的 通过研究锌指Krüppel 样转录因子2( Klf2) 及红系衍生核因子相关因子2 ( Nrf2) /BTB-CNC 异体同源体1( Bach1) 在经香烟烟雾提取物( CSE) 刺激的大鼠气道上皮细胞中的表达, 了解其感受氧化应激对靶基因γ-谷氨酰半胱氨酸合酶( γ-GCS) 的调控作用。方法 采用酶消化法提取大鼠原代气管-支气管上皮细胞, 并用10% CSE 干预细胞6 h, 收集细胞, 双酶法检测γ-GCS 活性; 通过免疫细胞化学法观察Nrf2 /Bach1 的核转位; 采用Western blot 和RT-PCR 技术研究细胞中 Klf2、Nrf2、Bach1、γ-GCS 的蛋白及mRNA 表达。结果 大鼠气管-支气管上皮细胞经CSE 诱导后其 γ-GCS活性明显增高。免疫细胞化学结果显示Nrf2 经CSE 刺激后出现由核外向核内的转位, Bach1 经CSE 刺激后出现由核内向核外的转位。Western blot 结果显示CSE 处理组中Klf2、Nrf2、Bach1、 γ-GCS蛋白水平较对照组显著升高( Plt;0.05) ; RT-PCR 结果显示CSE 处理组中Klf2、Nrf2、Bach1、 γ-GCS mRNA 水平较对照组显著升高( Plt;0.05) 。直线相关分析表明γ-GCS 蛋白表达与Klf2、Nrf2、 Bach1 呈正相关( Plt;0.05) 。结论 CSE 可能通过转录因子Klf2、Nrf2、Bach1 调节γ-GCS 的表达。

    发表时间:2016-09-13 04:00 导出 下载 收藏 扫码
  • 柚皮素对人肺成纤维细胞表达血管内皮生长因子的影响

    目的探讨柚皮素对人肺成纤维细胞生成血管内皮生长因子(VEGF)的影响,并研究其可能的机制。 方法培养人胚肺成纤维细胞,分为对照组、香烟提取物(CSE)组和柚皮素干预组。柚皮素干预组分别与低、中、高剂量的柚皮素共孵育2 h后,与CSE组一起加入CSE,调整终浓度柚皮素5 μmol/L、10 μmol/L和20 μmol/L,CSE终浓度5%。培养24、48及72 h后,ELISA法测定各组VEGF含量,采用Western blot法观察各组Smad3及磷酸化Smad3(p-Smad3)的表达情况。 结果在人胚肺成纤维细胞中,柚皮素能抑制CSE诱导的血管内皮生长因子生成。CSE能显著提高p-Smad3水平,而添加了柚皮素后p-Smad3明显减少,并随柚皮素剂量的增加而p-Smad3水平愈低。 结论柚皮素能够抑制Smad3的磷酸化,从而抑制CSE诱导的血管内皮生长因子的分泌。

    发表时间: 导出 下载 收藏 扫码
  • 单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白对香烟烟雾提取物刺激A549细胞后产生效应的影响

    目的观察单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白(SIGIRR)对香烟烟雾提取物(CSE)刺激的小鼠肺泡上皮细胞株A549炎性反应的影响。 方法将A549细胞分为过表达SIGIRR组和对照组。构建含有SIGIRR cDNA全长的真核表达载体pcDNA3.1(+), 瞬时转染小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞来源的A549细胞, 使SIGIRR在A549细胞中过表达, 采用半定量Western blot和RT-PCR法检测其表达。以CSE刺激对照组及过表达SIGIRR组中A549细胞后, ELISA法检测白细胞介素6(IL-6)水平, 双荧光素酶报告系统检测环氧化酶2(COX-2)表达水平, 化学发光法检测活性氧(ROS)释放水平的变化。 结果转染SIGIRR表达载体的A549细胞其SIGIRR表达量显著上升。对照组经CSE刺激后, COX-2表达、ROS释放、IL-6释放水平均显著增高, 而过表达SIGIRR组的A549细胞经CSE刺激后, COX-2表达较对照组降低, ROS释放较对照组降低, IL-6释放水平也明显低于对照组(P<0.05)。 结论SIGIRR表达上调可以抑制CSE诱导的A549细胞产生ROS、COX-2及IL-6, 提示SIGIRR表达上调可能对吸烟所致呼吸道炎症具有抑制作用。

    发表时间:2016-10-02 04:55 导出 下载 收藏 扫码
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