• 1. 海军军医大学附属第一医院 长海医院呼吸与危重症医学科(上海 200433);
  • 2. 解放军陆军第 948 医院急诊科(新疆乌苏 833000);
  • 3. 约翰霍普金斯大学医学院呼吸与危重症医学科(美国马里兰州巴尔的摩 21205);
  • 4. 上海同济大学附属东方医院呼吸与危重症医学科(上海 200120);
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目的 建立一种小鼠气管–支气管上皮细胞气–液界面(ALI)培养及纤毛摆动频率测量的方法,最大程度还原气道上皮的生理功能。方法 利用 1 mg/mL ⅪⅤ型链蛋白酶冷消化的方法获取 BALB/c 小鼠气管–支气管上皮细胞,筛选出最佳消化时长以保证所得细胞的数量及活力。差速贴壁法去除成纤维细胞后,接种于Ⅰ型鼠尾胶原预包被的 Transwell 小室,用不同培养基进行增殖期和 ALI 分化期培养。结果 采用链蛋白酶冷消化 12 h、14 h 和 16 h 所得细胞数目分别为(1.78±0.33)×105、(1.93±0.26)×105和(2.01±0.28)×105,经台盼蓝染色活细胞率分别为(96.86±0.25)%、(94.73±1.63)% 和(86.87±5.95)%。1 周左右细胞铺满小室,继续 ALI 培养 2~3 周后光学显微镜下可见纤毛节律性摆动,电镜及免疫荧光均证实纤毛结构。培养所得细胞纤毛摆动频率与小鼠气管在体纤毛摆动频率与一致。结论 本实验建立的气管–支气管上皮细胞分离、ALI 培养及纤毛摆动频率测量体系简便、稳定、高效、可靠,为探索气道疾病的致病和治疗机制创造了基础,亦可为其他物种气道上皮和(或)其他器官上皮的培养提供参考依据。

引用本文: 陈思, 肖华, 张伟, 孔晨, 陈长明, VenkataramanaSidhaye, 李强, 白冲. 小鼠气管–支气管上皮细胞的气–液界面培养. 中国呼吸与危重监护杂志, 2019, 18(4): 362-368. doi: 10.7507/1671-6205.201903074 复制

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