• 1. 广州医科大学附属第一医院 呼吸疾病国家重点实验室(广东广州 510120);
  • 2. 广州医科大学第一临床学院(广东广州 510120);
  • 3. 广州医科大学基础学院(广东广州 510120);
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目的 建立流式细胞术检测大鼠肺泡巨噬细胞(AM)吞噬 AlexaFluor 488(AF488)荧光染料标记细菌的方法。方法 用不同浓度的 AF488 标记金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌,流式细胞术检测 AF488 对上述细菌的标记率和平均荧光强度;AM 与不同浓度比例的 AF488 标记的细菌于 37 ℃ 共孵育 2、4、6 和 8 h,洗涤后加台盼蓝淬灭未被吞噬的细菌荧光,流式细胞术检测 AM 平均荧光强度、吞噬率和吞噬指数;激光共聚焦荧光显微镜下观察 AM 吞噬细菌的情况及分布。结果 AF488 的浓度大于 50 μg/mL 时,金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌的标记率均大于 92%(P<0.05),金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌的标记率在荧光染料浓度大于 50 μg/mL 便已迅速达到上限。随着孵育时间的延长,AM 的吞噬率从孵育 2 h 的 20.4% 升高到 8 h 的 76.5%。随着细菌比例的增加,AM 的吞噬率从 1∶10 的 7.7% 升高到 1∶300 的 85.1%。结论 流式细胞术检测 AM 吞噬 AF488 荧光染料标记的细菌是测定 AM 吞噬活性的有效方法,但染料浓度、孵育时间和细菌比例均会对结果产生影响。

引用本文: 李乃健, 潘天惠, 何芳, 冉丕鑫. 流式细胞术检测大鼠肺泡巨噬细胞吞噬荧光标记细菌的方法学探讨. 中国呼吸与危重监护杂志, 2019, 18(5): 479-483. doi: 10.7507/1671-6205.201803034 复制

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